Phos-tag™ 是一種能與磷酸離子特異性結合的功能分子,可與蛋白上的磷酸基團結合。在SDS-PAGE中,在有二價金屬離子(Mn2+/Zn2+)參與的條件下,磷酸化蛋白與Phos-tag™ 結合,電泳遷移速度變慢,從而與非磷酸化蛋白分離。
Wako的SuperSep™ Phos-tag™ 是一種即開即用型的預制膠,含有50 μmol/L的Phos-tag™ 丙烯酰胺,含有Zn2+ 作為金屬離子,保存穩定性長達半年,得到的條帶整齊。多種規格型號,適合Bio-rad/Life Technolofies/EasySeperator等多種電泳儀。全批次均經過嚴格檢驗,保證能分離磷酸化與非磷酸化條帶。
應用實例:
1. β-casein
使用Tris-甘氨酸(TG),Tris-Tricine(TT)或Tris-MOPS(TM)三種不同runningbuffer比較β-casein在SuperSepTMPhos-tagTM預制膠中磷酸化蛋白的遷移率。
2. 鼠腦來源Dnmt1磷酸化實驗
從鼠腦提取液中純化得到GST-Dnmt1(1-290)結合蛋白,作為體外激酶實驗的反應底物,在SuperSep™ Phos-tag™ 預制膠中檢測到了激酶的存在。
3. 二維電泳分析hnRNP K磷酸化異構體
小鼠巨噬細胞J774.1 經LPS 刺激后,裂解細胞,經過免疫沉淀法分離得到hnRNP K。在二維電泳中,一維是IPG 膠,二維是SuperSep™ Phos-tag™ 預制膠,可分離hnRNP K 的異構體。利用質譜儀確認不同的點代表不同的亞型或修飾蛋白。
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